产品内容： | S665546 | Component | 50 T | Storage | | S665546A | Buffer QSL | 45 mL | RT | | S665546B | Buffer RIL | 11 mL | 2-8℃ | | S665546C | Buffer ML | 10 mL | RT | | S665546D | Buffer GW1 (concentrate) | 13 mL | RT | | S665546E | Buffer GW2 (concentrate) | 26 mL | RT | | S665546F | Buffer EBL | 13 mL | RT | | S665546G | RNase A | 240 μL | RT | | S665546H | Lysis Tubes Ⅱ | 50 EA | RT | | S665546I | Spin Columns DM With Collection Tubes | 50 EA | RT |
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产品简介 本试剂盒提供了一种从土壤或粪便样本中提取总DNA，包括样本中的细胞、细菌 、寄生虫以及病毒的总DNA的方法，也适用于含有高浓度PCR反应抑制剂的样本DNA 的提取。本试剂盒采用独特的缓冲系统使裂解液中的DNA高效结合到吸附柱上，PCR 和酶反应的抑制剂以及残留的杂质可通过洗涤步骤有效去除，最后使用低盐缓冲液或 水洗脱，即可获得高纯度DNA。纯化得到的DNA可以直接用于二代测序(16S扩增子和 宏基因组)、文库构建、PCR、qPCR、Southern Blot、酶切分子标记等下游实验。 自备试剂 1. 恒温混匀仪 2. 无水乙醇，异丙醇 3. 涡旋振荡仪或组织研磨仪 实验前准备及重要注意事项 1．样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量下降。 2．**次使用前应按照试剂瓶标签的说明预先在Buffer GW1（concentrate）和Buffer GW2（concentrate）中加入无水乙醇。 3．Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在 2-8℃储存。 操作步骤 1. 短暂离心Lysis Tube以使珠子沉淀在底部。 2. a. 向Lysis Tube中加入0.1-0.3 g土壤或粪便样本，加入740-820 μL Buffer QSL与 4 μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。 b. 若为非裂解型粪便保存液（例如CWY041S和CWY041M）保存的粪便样本，向 Lysis Tube中加入200 μL-600 μL固液混合物，13000 rpm离心1 min，弃掉保存液 （若离心后的固体量过少，可再次富集，但不宜超过0.3g）。加入620μLBuffer QSL和4 μL RNase A，旋紧管盖，短暂涡旋以混合。 3. 将Lysis Tube固定在装有2 mL适配器的振荡研磨装置中，并根据您的设备使用优 化的研磨条件进行处理（参见附录）。 4. 将Lysis Tube在恒温混匀仪上以70℃，1200 rpm振荡10 min。随后13000 rpm离心 2 min以沉淀固体颗粒。转移540 μL上清液至新的2 mL离心管。 5. 加入180 μL Buffer RIL，涡旋5 sec，13000 rpm离心2 min。 注意：Buffer RIL待即将使用前取出，用完立即放在2-8℃储存。 6. 在新的离心管中依次加入160 μL Buffer ML、480 μL步骤5的上清液、320 μL异丙 醇，涡旋5秒。 7. 将上步中溶液转移650 μL到到已装入收集管的吸附柱（Spin Columns DM）中， 12,000 rpm（～13,400×g）离心1分钟。 8. 倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。重复步骤7直至溶液全部转移 完。 9. 向吸附柱中加入500μL Buffer GW1（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 10.向吸附柱中加入500 μL Buffer GW2（使用前检查是否已加入无水乙醇），12,000 rpm 离心1分钟，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。 11.重复步骤10。 12.12,000 rpm离心2分钟，倒掉收集管中的废液。将吸附柱置于室温数分钟，以彻底 晾干。 注意：这一步的目的是将吸附柱中残余的乙醇去除，乙醇的残留会影响后续的酶促反应（酶切、 PCR 等）。 13 将吸附柱置于一个新的离心管（自备）中，向吸附柱的中间部位悬空滴加50-200 μL Buffer EBL或灭菌水，室温放置2-5分钟，12,000 rpm离心1分钟，收集DNA溶 液，-20℃保存DNA。 注意：1）离心之前室温孵育5分钟可以增加产量。 2）用另外的50-100 μL 洗脱缓冲液或灭菌水再次洗脱可以增加产量。 3）如果要提高DNA的终浓度，可以将步骤13所得的DNA洗脱液重新加至吸附膜上，重复步骤13， 但可能会减少总产量。 4）洗脱缓冲液不含螯合剂，请置于-20℃保存DNA。 5）基因组DNA模板中残余的微量PCR抑制物可能对PCR反应产生不良影响，可将DNA稀释2-10倍 通常即可解决。 附录：使用以下方法之一研磨样本 1.在涡旋振荡仪上以最大速度手动涡旋振荡10 分钟。 2.在搭配有1.5-2 mL水平离心管支架的涡旋振荡仪上以最大速度振荡10分钟（让 Lysis Tube保持水平放置）。若样本数量超过12，延长5-10 分钟。 例如使用Scientific Industries或Mobio的Vortex-Genie2 涡旋振荡仪。 3.使用Qiagen的TissueLyser II时，以25Hz研磨10 分钟。 4.使用Qiagen的PowerLyzer 24 Homogenizer时，以2000 rpm 的速度均质化30 秒，暂停30 秒，然后以2000 rpm的速度再次均质化30 秒。 5.使用MP Biomedicals的FastPrep-24时，推荐速度为 6.0，时间为 40 秒。 | 
